CHS（胆甾醇半琥珀酸酯三羟甲基氨基甲烷盐）

产品描述

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CHS (胆甾醇半琥珀酸酯三羟甲基氨基甲烷盐) 为甾类阴离子型去垢剂助剂，分子以刚性胆固醇四环甾核作为疏水骨架，通过琥珀酸连接带负电的极性头基，Tris作为反离子实现水溶性，模拟天然胆固醇的分子构象。

CHS 单独在水中不形成可有效增溶膜蛋白的胶束（倾向形成囊泡样聚集体），不适合单独使用，通常与LMNG（货号：LMN01、LMN02、LMN03）等主去垢剂复配使用，嵌入去垢剂胶束内部重构类原生膜微环境。可显著提升G蛋白偶联受体(G Protein-Coupled Receptor，GPCR)等真核膜蛋白的热稳定性，抑制蛋白构象解折叠与聚集，保留蛋白生理活性。

产品基本信息

产品运输与储存

• 低温保存，防潮

• 粉末形态：-20℃可保存 3 年

• 溶于溶剂后：-80℃可保存 1 年

• 常温运输

核心亮点

• 纯度高，结构准，杂质少：采用精细化合成与纯化工艺，产物结构准确，相关杂质控制严格，产品整体性能与稳定性优异。

• 实现公斤级生产：具备成熟放大生产能力，可实现公斤级规模化制备，能够满足科研及中试阶段大批量供货需求。

• 工艺环保：生产流程选用环境友好型工艺路线，最大程度控制有害试剂的使用及有害副产物生成（如重金属盐），生产过程的环境负荷小。

适用领域与应用场景

• 膜蛋白提取纯化

• 蛋白结晶

• 冷冻电镜样品制备等结构生物学研究，

• 膜环境模拟添加剂（GPCR研究）

注意事项

1. 为了确保操作人员的安全与健康，实验全过程请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。

2. 本品所附带的部分产品技术信息仅供客户参考、学术交流与科学研究之用；我司不对所提供信息的绝对权威性与完整性作担保。

3. 本品仅供科学研究使用，严禁用于临床诊断、治疗、食品及药品等任何人体相关用途，禁止存放于普通住宅。

4. CHS固体易吸潮，称量需要快速，要保持环境干燥通风。称量结束立即密封瓶盖，减少水汽吸入造成结块变质。

产品数据

产品数据

IR

HNMR

HPLC

谛思自研LMNG&CHS提取纯化GPCR人源神经降压素受体1（hNTSR1）和腺苷A2A受体（A2AR）

SEC-HPLC 色谱图分析

下图为采用谛思自研 LMNG 去垢剂提取纯化得到 hNTSR1、A2AR 两种 GPCR 蛋白的 SEC-HPLC 色谱图。两张 SEC-HPLC 色谱图显示，采用美仑 LMNG & CHS 去垢剂纯化的 hNTSR1 与 A2AR GPCR 蛋白均存在少量聚合组分，主峰对称尖锐，目标蛋白具备良好的单分散性。

SDS-PAGE

两组样品电泳结果均显示相对单一清晰目的蛋白条带，分子量与GPCR受体理论值一致

谛思自研 LMNG 搭配 CHS 去垢剂，可很好地应用于 GPCR 类膜蛋白的溶膜裂解、亲和纯化、凝胶过滤层析完整纯化流程，蛋白纯化效果优异，可为膜蛋白相关科研工作提供高性价比的实验选择。

谛思自研LMNG&CHS提取纯化A2AR-Gs复合物冷冻电镜结果分析

下图为采用谛思（Distolife）自研LMNG/CHS去垢剂提取纯化获得的A2AR-Gs蛋白复合物冷冻电镜照片及二维分类结果。冷冻照片（图6A）中可观察到较为清晰的目的蛋白颗粒，二维分类结果（图6B）显示多个具有明显蛋白密度特征的颗粒类别，已与文献《Cryo-EM structure of the adenosine A2A receptor coupled to an engineered heterotrimeric G protein》报道的A2AR-Gs体系对比，发现具有较好的可比性。

图7为采用谛思（Distolife）自研LMNG/CHS去垢剂提取纯化获得的A2AR-Gs蛋白复合物三维重构结果。三位重构后获得约2.86 Å的整体分辨率。最终重构map中可以清晰观察到A2AR受体及G蛋白的整体密度，受体跨膜区域及G蛋白结合区域均具有较好的密度表现。

结合局部分辨率分析结果可以看到，受体跨膜区以及G蛋白结合区域具有较好的局部分辨率，整体结构质量理想。使用谛思自研LMNG与CHS纯化得到的蛋白数据，在整体分辨率及部分关键区域的局部分辨率获得了比参考文献更优的结果。

在完成三维重构后，对A2AR-Gs复合物结构模型进行了模型搭建及结构优化，使用Phenix进行real-space-refinement，并对结构模型的几何质量进行系统评价。

从结构优化后的关键质量指标中，Ramachandran favored达到96.78%，allowed为3.22%，disallowed为0%，表明模型整体主链构象合理，未发现明显的异常构象区域。

表1. A2AR-Gs蛋白复合物结构模型优化后的关键质量指标及文献结果对比

进一步将最终结构模型与重构map进行拟合分析，可以看到模型整体能够较好地匹配实验密度。在受体及G蛋白等关键结构区域，模型与map密度具有较好的吻合度。与文献报道的关键区域结构密度进行比较，本次结果整体具有更好的匹配度。

谛思自研LMNG&CHS提取纯化GCGR-Gs复合物冷冻电镜结果分析

下图为采用谛思（Distolife）自研LMNG/CHS去垢剂提取纯化获得的GCGR-Gs蛋白复合物冷冻电镜照片及二维分类结果。其中颗粒密度和颗粒对比度较为理想；二维分类在较少颗粒数量的情况下仍能够获得具有明确结构特征的分类结果。且本次实验在较少数据量及较少最终颗粒数的情况下，仍获得了与参考文献《Structural basis of Gs and Gi recognition by the human glucagon receptor》报道的数据有较好比较性的结果。

图10为采用谛思（Distolife）自研LMNG/CHS去垢剂提取纯化获得的GCGR-Gs蛋白复合物三维重构结果，包括最终整体分辨率、重构map及局部分辨率分析结果。

经过数据处理后，最终使用35,970个颗粒进行三维重构，获得3.69 Å整体分辨率。最终重构map中能够清晰观察到GCGR受体及G蛋白的整体结构密度。结合局部分辨率分析结果可以看到，受体核心区域，包括跨膜区及G蛋白结合区域，具有较好的密度表现。

与文献《Structural basis of Gs and Gi recognition by the human glucagon receptor》报道的结构结果比较，本次获得的整体分辨率与文献报道的3.7 Å基本处于相近水平，说明在相对有限的数据量条件下，仍能够有效完成GCGR-Gs复合物的三维重构。

对GCGR-Gs复合物进行了结构模型搭建和优化，使用Phenix进行real-space-refinement，并对模型几何质量进行系统评价。

从结构优化后的关键参数来看，本次模型的键长、键角、MolProbity score、Clashscore、rotamer以及Ramachandran plot等指标均处于合理范围。其中，Ramachandran favored为96.81%，allowed为3.19%，disallowed为0%。

进一步将最终结构模型与实验map进行拟合分析，可以看到模型整体能够较好地匹配实验密度。在受体及G蛋白等关键区域，模型与map密度具有较好的吻合度，与文献对比后发现结构模型和关键区域密度表现具有较好的一致性。

表2. GCGR-Gs蛋白复合物结构模型优化后的关键质量指标及文献结果对比

以上的结果显示，谛思（Distolife）自研LMNG与CHS已在A2AR-Gs和GCGR-Gs两个代表性GPCR体系中完成从蛋白纯化到结构解析的应用验证，证明该自研去垢剂体系可以有效支持GPCR结构生物学研究。